測任何目標蛋白的抗體不止一種,同一家抗體公司可能有好幾種,甚至幾十種。在不同的抗體公司,則更多。那么在眼花繚亂的抗體陣中,如何選擇自己實驗需要的抗體呢?選擇適合實驗的抗體需要綜合考慮多個因素,包括實驗類型、樣本種屬、抗體的特異性、宿主物種來源以及是否需要熒光標記等。
ELISA試劑盒中HRP底物范圍較廣,HRP即辣根過氧化物酶(Horseradish Peroxidase)比活性高,穩(wěn)定,分子量小,純酶容易制備,所以最常用。過氧化物酶作為多個試劑盒顯色體系的關(guān)鍵成分,對試劑盒的質(zhì)量有重要影響。辣根過氧化物酶(Horseradish Peroxidase, HRP)的顯色原理基于其酶催化作用(氧化作用)。HRP酶標二抗,即辣根過氧化物酶標記的二抗,是生物學(xué)實驗常規(guī)用的二抗。其特點包括比活性高、穩(wěn)定性好、分子量小、純酶容易制備等,因此在免疫學(xué)實驗中廣泛應(yīng)用。HRP底物主要包括二氨基聯(lián)苯胺(DAB)、氯萘酚和氨乙基咔唑等。
免疫熒光(IF)是一種用于檢測以及識別細胞和組織中蛋白質(zhì)和其他分子的亞細胞分布和遷移的強大檢測技術(shù)。IF可用作免疫組織化學(xué) (IHC) 或免疫細胞化學(xué) (ICC) 中使用的傳統(tǒng)顯色標記的替代物。通過使用多種標記物的二級抗體,可以研究感興趣蛋白的共定位,這是不能通過常規(guī)IHC或ICC實現(xiàn)。這是同時分析許多目標蛋白時的一個優(yōu)勢,可同時生成大量亞細胞定位的準確數(shù)據(jù)。免疫熒光染色是一種常用的細胞和組織學(xué)研究技術(shù),它利用特異性抗體與標記熒光染料結(jié)合,來檢測和定位細胞中的特定蛋白質(zhì)或其他分子。