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發(fā)布日期:2025/1/22 14:06:00

細胞是生物體的結(jié)構(gòu)和功能的基本單位生物學(xué)名詞。一般具有細胞核、細胞質(zhì)和細胞膜。植物細胞的細胞膜外還有細胞壁。體形極微,在顯微鏡下始能窺見。形狀多種多樣,主要由細胞核與細胞質(zhì)構(gòu)成,表面有薄膜。動植物細胞結(jié)構(gòu)大致相同。植物細胞質(zhì)膜外有細胞壁,細胞壁中常有質(zhì)體,動物細胞質(zhì)中常有中心體,而高等植物細胞中則無。細胞有運動、營養(yǎng)和繁殖等機能。

 

下面分享影響細胞活躍度因素:

1、溫度

哺乳動物及人源細胞培養(yǎng)的適溫度為35-37V,對低溫耐受力比高溫強。39℃以上的培養(yǎng)環(huán)境細胞容易受損,甚至死亡。不低于0℃時((0-34),細胞能生存,但代謝降低、分裂延緩。

2、氣體環(huán)境和pH

動物細胞培養(yǎng)需要O2CO2。O2通量過大對細胞有毒害,一般使用空氣中的O2含量就可以。CO2則與維持培養(yǎng)基的pH有關(guān),細胞培養(yǎng)的-pH7.2-7.4,通過緩沖系統(tǒng)和調(diào)節(jié)CO2含量,可維持正常pH。

開放培養(yǎng)要求5%CO2環(huán)境、HEPES(羥乙基哌/嗪乙硫磺酸)10-50mmol/ml可防止培養(yǎng)基的pH變化。含Earle's緩沖系統(tǒng)的培養(yǎng)基適合于5%CO2的培養(yǎng)條件,Hank's緩沖系統(tǒng)的培養(yǎng)基僅含有0.35g/LNaHCO3,不能用于5%CO2的環(huán)境,若放入CO2培養(yǎng)箱,溶液將迅速變酸,使用時應(yīng)注意。

3濕度和光

利用多孔細胞培養(yǎng)板、方瓶、培養(yǎng)皿等開放培養(yǎng)時,相對濕度應(yīng)控制在95%以上。

動物細胞培養(yǎng)需避光,紫外線或可見光均可造成核黃素、酪氨酸、色氨酸等產(chǎn)生有毒的光產(chǎn)物,抑制細胞生長,降低其貼壁能力。

4、影響細胞生長的其他因素

細胞接觸橡膠用品,收集細胞時離心速度過大,細胞接種密度過低,細胞懸液或細胞培養(yǎng)物中氣泡形成等,均對細胞不利,會導(dǎo)致細胞死亡或生長繁殖抑制。

細胞是許多生物學(xué)實驗的主角。如果細胞心情不好,那么實驗的結(jié)果也不會好到哪兒去。如何讓細胞快樂?下面就仔細了解一下吧!

1. 確保所有實驗室材料都無菌

交叉污染是細胞培養(yǎng)的大敵。即使是最輕微的污染,也可能毀了幾個星期的成果。因培養(yǎng)箱內(nèi)溫暖潮濕,真菌極易生長,因此必須注意定期清潔。此外,在將培養(yǎng)瓶、移液管及其他的相關(guān)物品放入超凈臺之前,應(yīng)用酒精擦拭干凈,以避免污染。

2. 在使用前正確解凍細胞

盡管解凍看起來是個簡單的步驟,但必須操作得當(dāng),以免傷害細胞。長時間暴露在高溫條件下會使細胞無法鋪板。因此,凍存管應(yīng)當(dāng)在37°C水浴中放置2分鐘,然后用條件培養(yǎng)基稀釋,以避免DMSO造成直接傷害。

3. 小心處理您的培養(yǎng)物

細胞培養(yǎng)的脆弱性怎么強調(diào)也不為過。劇烈搖晃,或連續(xù)的溫度波動可能會對生長產(chǎn)生不利的影響。確保培養(yǎng)箱是水平的,溫度均一,且遠離電動儀器。此外,盡量避免一次處理多個細胞系,因為它可能會影響細胞的基因型和表型。您還應(yīng)定期完成STR圖譜分析,以確認細胞系的身份。

4. 使用對數(shù)生長期的細胞

細胞培養(yǎng)過程共有3個階段:停滯期、對數(shù)期和平臺期,分別代表了低細胞生長、高細胞生長和無細胞生長。最有活力的細胞是健康的,快速分裂的,在對數(shù)期以70-80%的匯合度存在。

5. 在傳代之前不要讓細胞匯合

匯合度是指貼壁細胞占據(jù)培養(yǎng)瓶表面積的比例。*匯合意味著100%的表面都被貼壁細胞覆蓋。一定要避免這種狀態(tài),因為它意味著細胞不能繼續(xù)生長。不過,當(dāng)務(wù)之急是使用活躍生長的細胞。

6. 選擇最佳的培養(yǎng)基開發(fā)策略

在細胞培養(yǎng)過程中,培養(yǎng)基是控制產(chǎn)品質(zhì)量、產(chǎn)量和成本的最重要因素。必須針對每種培養(yǎng)物來定制培養(yǎng)基,以優(yōu)化實驗結(jié)果。在決定以哪種方式來開發(fā)您的培養(yǎng)基時,您有幾個選擇。您可以購買現(xiàn)成的,自己開發(fā),也可以與另一家公司合作開發(fā)特定的培養(yǎng)基。在這個過程中,您需要考慮時間和成本等因素。

 

 

 

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